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對于顯色液的使用你做的正確嗎?看這里
更新時(shí)間:2020-09-26 點(diǎn)擊次數(shù):2706次
顯色液是一種采用了較新單一溶液顯色技術(shù),通過辣根過氧化物酶(HRP)催化TMB顯色,用于ELISA等的顯色液。本顯色液也可以用于檢測血液或血紅蛋白等樣品中的過氧化物酶含量。
通常的顯色試劑由多個組份組成,必須在使用前進(jìn)行配制,并且容易產(chǎn)生沉淀,使用相對不太方便,并且也容易導(dǎo)致檢測結(jié)果不太穩(wěn)定。本顯色液采用了較新的顯色技術(shù),把所有的相關(guān)試劑全部配制在一個溶液中,僅由單一溶液組成,簡化了操作步驟,并且使檢測結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。
顯色液的使用方法:
用適當(dāng)?shù)母蓛羧萜?用純凈水反復(fù)沖洗),倒出適量的單組分TMB顯色液,待達(dá)到室溫后即可使用。
加液:加完HRP結(jié)合物并孵育一定時(shí)間后,用適當(dāng)洗滌液洗板3-5次,每孔加TMB顯色液100ul。 根據(jù)個人實(shí)驗(yàn)需要,在室溫(15-25℃)或37℃下避光溫育10-30分鐘或更長時(shí)間,直至顯色至預(yù)期深淺。
終止:加入等體積的1M 鹽酸或硫酸溶液終止反應(yīng),孔中反應(yīng)液由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
讀數(shù):終止反應(yīng)后30分鐘內(nèi)在450nm處測定吸光值。
注意:如果出現(xiàn)高的反應(yīng)背景或沉淀,表明TMB底物反應(yīng)過于強(qiáng)烈。為了避免產(chǎn)生沉淀,可在終止后馬上讀數(shù);或者進(jìn)一步稀釋一抗和/或HRP結(jié)合物。